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大腸桿菌HMS174 (DE3)說明書

更新時(shí)間：2023-10-24 點(diǎn)擊次數(shù)：519

大腸桿菌HMS174 (DE3)說明書

產(chǎn)品描述

本品為大腸桿菌HMS174 (DE3)（基因型：K-12,F-,λDE3[lacI,lacUV5-T7gene1,ind1,sam7,nin5],recA1,hsdR19,IN(rrnD-rrnE)1,rph-1,rpoB331(rifR)）制作的高效感受態(tài)，該菌株源于大腸桿菌K12菌株，含有RecA突變。對(duì)于能夠?qū)е?/span>DE3噬菌體損失的特定基因，該菌株能夠穩(wěn)定表達(dá)這種基因。DE3是溶源性的λDE3，帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝，可在IPTG誘導(dǎo)下表達(dá)T7 RNA聚合酶。HMS174 (DE3)具有完整的乳糖代謝途徑，故在誘導(dǎo)蛋白表達(dá)時(shí)，可以用乳糖同時(shí)作為唯yi碳源和誘導(dǎo)劑，因此不需要IPTG作為誘導(dǎo)劑，成本比BL21(DE3)以葡萄糖做碳源，以ITPG做誘導(dǎo)劑的表達(dá)模式低，適合工業(yè)級(jí)大規(guī)模表達(dá)外源蛋白。該菌株同時(shí)具有利福平抗性。HMS174 (DE3)是染色體上攜帶lacUV-T7 RNA聚合酶基因的專門用于蛋白表達(dá)的K-12菌株。該菌株適用于pET系列載體，及其他T7啟動(dòng)子系列載體，與BLR(DE3)類似。經(jīng)pUC19 質(zhì)粒（2686bp，AmpR）檢測轉(zhuǎn)化效率>1×107 cfu/μg DNA。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞解凍后應(yīng)立即使用，不可在冰中放置過長時(shí)間。

2. 不能用移液器抽吸感受態(tài)細(xì)胞，用手指輕彈混勻即可。

3. 質(zhì)粒使用量<50 ng即可獲得很好的轉(zhuǎn)化。

使用方法

1. 從-80 ℃冰箱中取出感受態(tài)細(xì)胞，放入冰中5 min，加入目的質(zhì)粒或連接產(chǎn)物，輕彈使混合均勻，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴鍋中熱激90 s，立即插入冰中靜置2-3 min；

3. 添加900 μL LB液體培養(yǎng)基，37℃搖床220 rpm培養(yǎng)60 min；

4. 離心（質(zhì)粒轉(zhuǎn)化無需離心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均勻涂布抗性平板，37℃培養(yǎng)箱放置過夜。